目前,市面上僅有兩種新型的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法,分別是重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC)。
重組鱟試劑
重組鱟試劑(rCR)和重組C因子(rFC) 檢測(cè)方法的區(qū)別是什么?
1 反應(yīng)原理
左側(cè)為重組鱟試劑(rCR) 右側(cè)為重組C因子(rFC)
2 檢測(cè)方法
01 重組鱟試劑(rCR)使用動(dòng)態(tài)顯色法
重組鱟試劑(rCR)不需要更換方法和設(shè)備,使用現(xiàn)有的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法(動(dòng)態(tài)顯色法)和設(shè)備就能進(jìn)行檢測(cè)和分析。
PKF型細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)
02 重組C因子(rFC)使用終點(diǎn)熒光法
重組C因子(rFC)以終點(diǎn)法定量測(cè)定熒光底物的單步酶促反應(yīng)裂解產(chǎn)物來量化細(xì)菌內(nèi)毒素,需要特定熒光酶標(biāo)儀,經(jīng)孵育后才可進(jìn)行檢測(cè)。
3 復(fù)溶過程
01 重組鱟試劑(rCR)只需單步復(fù)溶
重組鱟試劑(rCR)只需單步復(fù)溶,檢測(cè)試劑用量50μL,完成檢測(cè)僅需15分鐘,既節(jié)省了檢測(cè)成本,又提高了檢測(cè)效率。
02 重組C因子(rFC)需預(yù)孵化
重組C因子(rFC)則較為復(fù)雜。檢測(cè)前,三種試劑酶溶液、緩沖液、底物溶解比例為 1:4:5,且必須經(jīng)過預(yù)孵化步驟(過程不低于10分鐘),檢測(cè)試劑用量100μL,降低了檢測(cè)效率,檢測(cè)成本也大大增加。
4 檢測(cè)樣品
如圖所示,適合性/一致性研究測(cè)試了多個(gè)成品、水、緩沖液等樣品,得出重組鱟試劑(rCR)比重組C因子(rFC)有較低的不干擾稀釋倍數(shù)。
注:綠色的相對(duì)回收率表示有效的回收率,紅色的回收率是無效的(超出可接受范圍)
基于以上數(shù)據(jù)得出結(jié)論,重組鱟試劑(rCR)適合于廣泛的產(chǎn)品檢測(cè)??杀刃匝芯繙y(cè)試了多種來源的細(xì)菌內(nèi)毒素和水樣,證實(shí)應(yīng)用重組鱟試劑(rCR)檢測(cè)具有較好的相對(duì)回收率。
5 總結(jié)
新的內(nèi)毒素檢測(cè)方法已經(jīng)是大勢(shì)所趨。從檢測(cè)原理、方法、前期準(zhǔn)備、檢測(cè)樣品及檢測(cè)時(shí)間等方面來看,重組鱟試劑(rCR)較重組C因子(rFC)具有以下優(yōu)勢(shì):
基因重組鱟試劑 | 動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑 | 動(dòng)態(tài)顯色法鱟試劑 | 凝膠法鱟試劑 | 凝膠法快速檢測(cè)試劑 |