幾種血液中內(nèi)毒素的前處理測定方法

（1）氯仿提取法：測定方法如下：

（2）稀釋加熱法：即水稀釋加熱法作為簡便的前處理方法被普遍采用，由于稀釋倍數(shù)，加熱溫度和時間不同，結(jié)果也不全相同，其中主要方法見表6。

在這些方法中由于不確定因素太多，因此值得探索的地方很多。為了克服稀釋加熱法的缺陷，避免濁度生成，人們開發(fā)出了使用表面活性劑（0.04% TritonX -100）稀釋，80℃5分鐘加熱處理方法。這個前處理方法，能得到很好的血漿內(nèi)毒素回收率。減少非特異性濁度所引起的假陽性反應(yīng)。尤其是日本和光純藥的Toxinonuter ET201采用比濁時間分析法檢測，能得到很好的實驗結(jié)果。

（3）高氯酸法（PCA）與新高氯酸法（New PCA）：所謂高氯酸法（PCA），即血漿加高氯酸后，產(chǎn)生的變性沉淀物用離心法除去，用上清液進行比色測定。后來人們又發(fā)現(xiàn)這些沉淀物中含有內(nèi)毒素活性物質(zhì)，因而對變性的血漿蛋白不進行沉淀，而進行現(xiàn)溶解處理，這就是新高氯酸法（New PCA），一般新高氯酸法的測定結(jié)果要比高氯酸法高8~10倍。

一般高氯酸法只測定血中游離的內(nèi)毒素，而新高氯酸法可以將游離內(nèi)毒素和蛋白結(jié)合內(nèi)毒素一起測定出來。也就是說，新高氯酸的測定值減去高氯酸法的測定值，就等于結(jié)合型內(nèi)毒素的量；我們可以同時使用兩種方法檢測以查明內(nèi)毒素與蛋白的結(jié)合情況，并且可以對病人的病情發(fā)展進行分析。具體測定方法如下所示：

另外，在我們對血漿中的內(nèi)毒素和鱟試驗法檢測時，前處理加熱對血漿中和水中內(nèi)毒素影響要有一個認(rèn)識。細(xì)菌內(nèi)毒素在人體內(nèi)的分布往往以兩種方式存在，一種為游離型，另外一種為蛋白結(jié)合型。我們知道，細(xì)菌內(nèi)毒素在水中存在時對加熱是十分敏感的，而在血中的情況又是怎樣的？人們通過實驗發(fā)現(xiàn)：血漿中的內(nèi)毒素在經(jīng)過100℃加熱1分鐘或10分鐘，其標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有出現(xiàn)明顯的差別。而水中的內(nèi)毒素經(jīng)1分鐘加熱后，其標(biāo)準(zhǔn)曲線趨向平坦，10分鐘加熱后，接近水平。這可能是脂多糖分子在水中加熱后出現(xiàn)集結(jié)的原故。而在血漿的內(nèi)毒素則不同，團塊的形成會受到血小板的抑制，內(nèi)毒素可與多種血液成分結(jié)合，如血小板﹑抗體、粘性蛋白等，這些物質(zhì)可能保護血漿內(nèi)毒素與LAL發(fā)生反應(yīng)。因此這就是加熱血漿也不會破壞其內(nèi)毒素的原因。